荧光共振能量转移 (FRET)

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FRET 滤光片组

FRET 是测量两个不同位点之间距离以及距离变化的有效工具,其对距离的变化非常敏感,被称为 “ 光谱尺 ” (spectroscopic ruler) ,其特征距离为 1 - 10 nm。

如果一个荧光基团 ( 供体 ) 的发射光谱和另一个荧光基团 ( 受体 ) 的吸收光谱有重叠,那么当两者的距离在 1 - 10nm 之间时,供体会通过偶极 - 偶极相互作用 (dipole - dipole interaction) 将能量以非辐射的方式传递给受体,供体回到基态而不发射荧光,同时受体被激发,衰变到基态时发射荧光,这一过程称为荧光共振能量转移。

FRET 效率值可通过荧光强度或者荧光寿命的测量得到,计算公式为:E = 1 - FDA/FD 或 E = 1 - τDA/τD其中,FD 为受体不存在时,供体的荧光强度;FDA 为受体存在时供体的荧光强度。τD 为受体不存在时,供体的荧光寿命;τDA为受体存在时,供体的荧光寿命。

根据实验需求或者显微镜配置的不同,FRET 滤光片可以采用不同的搭配。在供体单激发的配置中,只包含一个激发片用来激发供体,包含两个发射片用来接收供体和受体的荧光。两个发射片需要安装在滤光片转轮上,通过转轮切换不同的发射片,分别进行供体和受体的荧光接收。如果将发射片安装在分光器件中,则需要额外配置一个用于分光的二向色镜。

在有些实验中,需要对受体进行激发,比如确认所有受体分子的分布,对受体分子进行光漂白等。这种配置中包含两个激发片分别激发供体和受体,包含一个双波段二向色镜和两个发射片。两个发射片需要安装在滤光片转轮上,通过转轮切换不同的发射片,分别进行供体和受体的荧光接收。如果将发射片安装在分光器件中,则需要额外配置一个用于分光的二向色镜。

ET 系列 - 宽场 FRET 滤光片组 ( 供体单激发 )


FRET 探针对
激发片
激发二向色镜
发射片 (供体)
发射片 (受体)
分光二向色镜
BFP/GFP
ET395/25x
T425lpxr
ET455/50m
ET525/50m
T495lpxr-UF
CFP/YFP
ET436/20x
T455lp
ET480/40m
ET535/30m
T505lpxr-UF
GFP/RFP
ET470/40x
T495lpxr
ET525/50m
ET630/75m
T570lpxr-UF
Cy3/Cy5
ET545/25x
T565lpxr
ET605/70m
ET700/75m
T660lpxr-UF


ET 系列 - 宽场 FRET 滤光片组 ( 供体和受体双激发 )


FRET 探针对
激发片 (供体)
激发片 (受体)
激发二向色镜
发射片 (供体)
发射片 (受体)
分光二向色镜
BFP/GFP
ET402/15x
ET490/20x
69002bs
ET455/50m
ET535/50m
T495lpxr-UF
CFP/YFP
ET430/24x
ET500/20x
69008bs
ET470/24m
ET535/30m
T505lpxr-UF
GFP/RFP
ET470/40x
ET572/35x
59022bs
ET525/50m
ET632/60m
T570lpxr-UF
Cy3/Cy5
ET545/25x
ET640/30x
59007bs
ET595/50m
ET690/50m
T660lpxr-UF


ET 系列 - 溶液单分子 FRET / FRET-FCS 滤光片组


FRET 探针对
激光
激发片 (受体)
激发二向色镜
发射片 (供体)
发射片 (受体)
分光二向色镜
BFP/GFP
405 nm
ZET405/20x
ZT405rdc-UF1
ET455/50m
ET525/50m
T495lpxr
CFP/YFP
442 nm
ZET436/20x
ZT442rdc-UF1
ET480/40m
ET535/30m
T505lpxr
GFP/RFP
488 nm
ZET488/10x
ZT488rdc-UF1
ET525/50m
ET630/75m
T570lpxr
Cy3/Cy5
532 nm
ZET532/10x
ZT532rdc-UF1
ET575/50m
ET700/75m
T660lpxr


ET 系列 - 表面单分子 FRET 滤光片组


激光
激发片
激发二向色镜
多波段
发射片 (供体)
发射片 (受体)
分光二向色镜
405/488 nm
ZET405/488x
ZT405/488rpc-UF2
ZET405/488m
ET450/50m
ET525/50m
T495lpxr-UF
442/514 nm
ZET442/514x
ZT442/514rpc-UF2
ZET442/514m
ET480/40m
ET545/40m
T505lpxr-UF
442/532 nm
ZET442/532x
ZT442/532rpc-UF2
ZET442/532m
ET500/40m
ET585/65m
T525lpxr-UF
488/561 nm
ZET488/561x
ZT488/561rpc-UF2
ZET488/561m
ET525/50m
ET610/75m
T560lpxr-UF
488/594 nm
ZET488/594x
ZT488/594rpc-UF2
ZET488/594m
ET525/50m
ET645/75m
T570lpxr-UF
488/640 nm
ZET488/640x
ZT488/640rpc-UF2
ZET488/640m
ET525/50m
ET655lp
T570lpxr-UF
532/640 nm
ZET532/640x
ZT532/640rpc-UF2
ZET532/640m
ET585/65m
ET655lp
T635lpxr-UF


分光二向色镜规格


厂家
型号
分光二向色镜
发射片
Carin Research
OptoSplit II, OptoSplit II ByPass, Optosplit III, Multisplit V2, TwinCam, MultiCam
UF2: 26 x 38 x 2mm, Flatness </= 0.5 waves/inch
25mm 直径,3.5mm 厚度
Photometrics
DC2, DV2
UF1: 18 x 26 x 1mm, Flatness </= 2.0 waves/inch


DVΛ
UF2: 26 x 38 x 2mm, Flatness </= 0.5 waves/inch


QV2


UF1: 12.5mm Diameter, 1mm thickness
Flatness </= 2.0 waves/inch

Hamamatsu
W-View Gemini
UF1: 25.5 x 36 x 1mm, Flatness </= 2.0 waves/inch
UF2: 25.5 x 36 x 2mm, Flatness </= 0.5 waves/inch


W-View Gemini-2C


Andor
Optosplit III
UF2: 26 x 38 x 2mm, Flatness </= 0.5 waves/inch